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產(chǎn)品介紹

Indo-1是一種細(xì)胞生物學(xué)常用的鈣離子熒光探針，與Fura-2為目前使用最廣泛的比率法測定的鈣熒光指示劑，Indo-1能特異性地結(jié)合Ca2+，同時(shí)可發(fā)出熒光，結(jié)合Ca2+后的最大發(fā)射波長從結(jié)合前的475nm向400nm（Ca2+飽和時(shí)）偏移，該信號變化可被流式細(xì)胞儀較好的捕捉：在氬離子激光器的351-364光譜范圍內(nèi)單一波長激發(fā)該探針，在400nm和475nm的波長處分別檢測結(jié)合鈣離子和未結(jié)合鈣離子的熒光信號，通過二者熒光強(qiáng)度的比率測定鈣離子濃度。

由于Indo-1是極性大的酸性化合物，無法進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，為此在其負(fù)性基團(tuán)上結(jié)合乙酰氧甲酯，使其成為Indo-1/AM，該變化既增加了酯溶性又消除了負(fù)電荷，極大的提高了細(xì)胞滲透性。在細(xì)胞內(nèi)，Indo-1/AM被酯酶水解成Indo-1后可與胞漿游離Ca2+可逆性結(jié)合。

 產(chǎn)品性質(zhì)

CAS號（CAS NO.）：112926-02-0

分子式（Formula）：C47H51N3O22

分子量（Molecular Weight）：1009.91

Ex/Em：346nm/475nm

溶解性（Solubility）：溶于DMSO

存儲條件：-20 ℃避光保存。

使用說明：

1）Indo-1/AM儲存液的配制

利用高質(zhì)量無水DMSO溶解Indo-1/AM配制成2-5mM的儲存液，該儲存液可分裝于-20℃避光干燥密封保存。每次使用前需回溫至室溫。

【注】： ① 因?yàn)镮ndo-1/AM在水中的溶解性和穩(wěn)定性較差，不可用水溶性緩沖液配制Indo-1/AM儲存液。

② 溶解用的DMSO需要保證新鮮無水，否則將會導(dǎo)致AM 體水解，使熒光染料無法進(jìn)入細(xì)胞，影響實(shí)驗(yàn)效果。

2）Indo-1/AM工作液的配制

利用合適緩沖液(如Hanks & Hepes )將Indo-1/AM稀釋成1-10μM的工作液，具體稀釋方法如1 mM母液配制1 ml濃度為4 μM工作液，用1 ml 緩沖液稀釋4 μl 1mM母液即可，混勻。

【注】： ① 典型工作液濃度為0.1-5μM，對于大多數(shù)細(xì)胞，我們推薦加載濃度4-5μM，具體的使用濃度需根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求進(jìn)行優(yōu)化。為了避免過度加載造成細(xì)胞毒性，建議在取得有效結(jié)果的基礎(chǔ)上盡量使用最低探針濃度。

② Indo-1/AM工作液需現(xiàn)配現(xiàn)用，避免反復(fù)凍存。

3）（可選）如果Indo-1/AM進(jìn)入細(xì)胞的效果不好，可向 Indo-1/AM/DMSO 儲存液中加入適量20% Pluronic F127溶液，最終稀釋至其終濃度為0.02-0.05%，Pluronic F127 可以防止 Indo-1/AM在緩沖液中聚合并能幫助其進(jìn)入細(xì)胞。

【注】：Pluronic F127可降低Indo-1/AM的穩(wěn)定性，因此只建議在配制工作液時(shí)加入，不建議將其加入儲存液長期保存。

4）取出預(yù)培養(yǎng)的細(xì)胞，除去培養(yǎng)基，使用緩沖液洗滌細(xì)胞3次。

【注】：如果使用含血清的培養(yǎng)基，血清中的酯酶會分解 AM 體，從而降低Indo-1/AM進(jìn)入細(xì)胞的效果。另外含有酚紅的培養(yǎng)基會使本底值略微偏高，所以加工作液之前需盡量去除培養(yǎng)基殘留。

5）將 Indo-1/AM工作液加入細(xì)胞，加入量以覆蓋細(xì)胞為準(zhǔn)。在37℃培養(yǎng)15-60min，然后除去Indo-1/AM工作液。

【注】：關(guān)于孵育的時(shí)間，如果首次做實(shí)驗(yàn)不能確定，建議先孵育30min，看熒光效果：如果細(xì)胞死亡較多，適當(dāng)縮短時(shí)間；如果熒光強(qiáng)度太弱，適當(dāng)延長時(shí)間。

6）用不含探針緩沖液洗滌細(xì)胞 3 次，以充分去除殘留的Indo-1/AM工作液。然后加入緩沖液覆蓋細(xì)胞。

7）37℃培養(yǎng)箱孵育約 20-30min，以確保 AM 體在細(xì)胞內(nèi)的完全去酯化作用。

8）流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞。

【注】： ① 某些細(xì)胞會將熒光探針被動運(yùn)輸或分泌到胞外，在一些通過陰離子泵泄漏探針的細(xì)胞內(nèi)該現(xiàn)象尤其嚴(yán)重，此時(shí)需加入一些抑制劑防止該情況的發(fā)生，如加入適量的丙磺舒或磺吡酮。但需注意，抑制劑的加入量必須經(jīng)過優(yōu)化，過量的抑制劑也會對細(xì)胞造成不利影響。

② 某些細(xì)胞具有自體熒光會影響結(jié)果分析，需使用未加載探針細(xì)胞做對照，在結(jié)果分析時(shí)在同一波長下扣除自熒光。

      為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

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